Luigi wyrusza na wymarzone wakacje z Mario i przyjaciółmi po otrzymaniu zaproszenia do luksusowego hotelu. Jednak jego sen szybko staje się koszmarem, gdy Król Boo ujawnia, że wszystko było sztuczką, aby schwytać Mario i przyjaciół. Z pomocą profesora E. Gadda, niechętny i tchórzliwy bohater Luigi przemierza zdradzieckie piętra obrzydliwego hotelu, by ich uratować.